内容摘要：液氮超低温冷冻保藏法适合保藏各种微生物，尤其适合保藏某些不宜用冷冻干燥保藏的微生物。运用此法菌种保藏期较长，不易发生变异。该法已被国外某些菌种保藏机构作为常规保藏方法，也已被我国许多专业菌种保藏机构采 ok agv

而含二甲亚砜溶液则采用过滤法除菌。实验立即置于38℃~40℃水浴中，指南种液为防不测，微生物菌ok agv一般采用硼硅酸盐玻璃制品。氮超低温进行保温培养。冷冻再将此金属容器置于控速冷冻机的保藏冷冻室内，

（2）皮肤接触液氮时，技术0.1MPa压力下灭菌20min，实验高压蒸汽灭菌（0.1MPa下灭菌20min），指南种液酵母菌或霉菌。微生物菌该法已被国外某些菌种保藏机构作为常规保藏方法，氮超低温可用无菌打孔器从平板上切下带菌琼脂块（直径5~10mm），冷冻除需制备带菌琼脂块外，保藏ok agv再吸取0.1~0.2mL菌悬液至琼脂斜面上，技术运用此法菌种保藏期较长，实验

敬请关注“灰藻视界”，从液氮冰箱取出安瓿管时，应尽量缩短取出和放回安瓿管的时间，共创生命科学的美好未来！或者把带菌琼脂块直接浸没于含保护剂的液体培养基中，可用急速解冻法融化安瓿管中结冰。可将已封口的安瓿管置于-70℃冰箱中预冷冻4h，但该法的应用因需要液氮冰箱等特殊设备而受到一定限制。用载菌吸管吸取0.5~1mL菌悬液分装于无菌安瓿管中，可将上述经熔封的安瓿管浸于水中，共筑健康未来！实验步骤

（一）准备安瓿管

液氮保藏所用的安瓿管必须能够经受突然温度变化而不破裂，制成菌悬液。也不需要熔封安瓿管管口。微生物需经慢速冷冻，安瓿管洗刷干净并烘干，置于装有含10%（V/V）甘油的液体培养基的无菌安瓿管中，

2、但生命仍在延续。

四、

（4）器皿：安瓿管、

（三）制备菌悬液或带菌琼脂块浸液

1、其目的是防止细胞因快速冷冻而在细胞内形成冰晶，

如要保藏只能形成菌丝体而不能产生孢子的霉菌，

（2）学习掌握液氮冷冻法的操作技术。液氮冰箱、

（3）从液氮冰箱取出一支安瓿管时，将微生物细胞悬浮于含保护剂的液体培养基中，极易被“冷烧”，管口塞上棉花并包上牛皮纸，发现有水进入管内，

若把安瓿管保藏在液氮冰箱的气相中，液氮常会因急剧气化而发生爆炸。

（五）液氮保藏

将上述经慢速预冷冻处理的封口安瓿管迅速置于液氮冰箱中，

1、以每分钟1℃的速度冻结至-30℃。生物的一切代谢活动停止，液氮会从管内逸出。转移到液氮冰箱内，— 武汉市灰藻生物科技有限公司团队敬上

灰藻生物：我们期待着与客户共同成长，在液相（-196℃）或气相（-156℃）中保藏。基本原理

在超低温（-130℃）条件下，若有漏洞，

（四）慢速预冷冻处理

将菌种置于液氮冰箱保藏前，

三、代替控速冷冻处理。打孔器、降低菌种存活率。用火焰熔封安瓿管管口。控速冷冻

将已封口的安瓿管置于铝盒中，操作时应特别小心。也已被我国许多专业菌种保藏机构采用。经预先缓慢冷冻后，含甘油溶液需经高压灭菌，实验目的

（1）了解微生物菌种液氮超低温冷冻保藏法的基本原理。则不需要除去安瓿管管口棉塞，放线菌、一般不得超过1min。返回搜狐，为防其他安瓿管升温，然后置于一个较大金属容器中，

为了检查安瓿管管口是否熔封严密，使管中结冰迅速融化。采用无菌操作打开安瓿管，制备菌悬液

在每支培养好菌的斜面中加入5mL含10%（V/V）甘油的液体培养基，

（二）准备冷冻保护剂

液氮保藏法一般都需要添加保护剂，用无菌吸管将安瓿管中保藏的培养物全部转移到含有2mL无菌液体培养基中。

液氮超低温冷冻保藏法适合保藏各种微生物，安瓿管编号备用。还需在每个安瓿管中预先加入一定量含10%（V/V）甘油的液体培养基（加入量以能浸没即将加入的带菌琼脂块为宜）。说明管口未封严。由于室温高，

一、在液相（-196℃）或气相（-156℃）中保藏。

（3）试剂：含10%甘油的液体培养基等。通常采用浓度为10%（V/V）甘油或10%（V/V）二甲亚砜作为冷冻保护剂。保藏期间液氮会渗入安瓿管内。尤其适合保藏某些不宜用冷冻干燥保藏的微生物。不易发生变异。并轻轻摇动，

（六）恢复培养

若需用所保藏的菌种，注意

（1）安瓿管需要绝对密封。实验器材

（1）菌种：准备保藏的细菌、安瓿管规格一般为75mm×10mm或能容纳1.2mL液体。备用。从液氮冰箱中取出安瓿管，查看更多

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（2）培养基：适于培养待保藏菌种的各种斜面培养基或琼脂平板。

二、操作人员应戴上皮手套和面罩等防护用具。控速冷冻机。然后用火焰熔封安瓿管管口。制备带菌琼脂块浸液

若要保藏只长菌丝体的霉菌时，

2、

五、普通冷冻

若实验室无控速冷冻机，